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藏黄牛与宣汉黄牛心脏表达谱比较(3)

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图1 藏黄牛和宣汉黄牛miRNA的长度分布及频率百分比Fig. 1 Length distribution and frequency percentage of miRNAs in Tibetan cattle and Xuanhan cattle

图2 藏黄牛和宣汉黄牛miRNA 差异表达统计图Fig. 2 Differential expression of miRNAs in Tibetan cattle and Xuanhan cattle

表3 差异表达中表达量较高的10个 miRNAsTable 3 10 miRNAs with high expression levels in differential expression基因名Gene namelog2(fc)P值P value序列Sequence miR-2285-y-2..0TCCAAGTGAACTTTTTGGCT miR-2284-y-2..00TCCAAGTGAACTTTTTGGCT bta-miR-10a-3..30E-06TACCCTGTAGATCCGAATTTGTG bta-miR-208b-2..00ATAAGACGAACAAAAGGTTTGT bta-miR-146b-3..28E-07TGAGAACTGAATTCCATAGGCTGT bta-miR-141-8..55E-27TAACACTGTCTGGTAAAGATGG bta-miR-200a-6..66E-10TAACACTGTCTGGTAACGATGTT bta-miR-2478-2..000GTATCCCACTTCTGACACCA bta-miR-19b-2..05E-05TGTGCAAATCCATGCAAAACTGA bta-miR-200c-7..53E-22TAATACTGCCGGGTAATGATGGA

表4 藏黄牛和宣汉黄牛miRNA靶基因位点预测统计Table 4 Predictive statistics of miRNA target genes loci inTibetan cattle and Xuanhan cattle样品名Sample namemiRNA数量miRNA number靶基因数量Target gene number靶基因位点数量Target site number 总数total2903 藏黄牛Tibetan cattle 宣汉黄牛Xuanhan cattle1125

KEGG Pathway富集分析结果表明，差异表达miRNAs靶基因显著富集到MAPK信号通路、mTOR信号通路、轴突导向和胰岛素信号通路等信号通路，图4为其中20条信号通路；在低氧适应相关通路中发现胰岛素信号通路涉及差异表达miRNAs的靶基因135个，mTOR信号通路涉及差异表达miRNAs的靶基因38个，HIF-1信号通路涉及差异表达miRNAs的靶基因65个，且有12个靶基因（PIK3C、PIK3R、RP-S6e、EIF4E、MAPK1-3、AKT、RPS6KB、IGF1、mTOR、EIF4EBP1、HIF1A、PRKCG）共同参与胰岛素信号通路、HIF-1信号通路和mTOR信号通路（表5）。

图3 藏黄牛和宣汉黄牛miRNA靶基因GO 富集分类柱状图（A:生物过程 B:分子功能 C：细胞组分）Fig. 3 Quantitative histogram of GO enrichment of miRNA target genes in Tibetan cattle and Xuanhan cattle（A :Biological process B: Molecular function C: Cellular component）

2.4 RT-qPCR验证

由图5可知，RT-qPCR结果表明，miRNA在宣汉黄牛和藏黄牛心脏组织中的表达趋势与高通量测序所得表达趋势基本一致，说明测序得到数据的可靠性高；且在RT-qPCR 验证中发现bta-miR-99a-5p在藏黄牛心脏组织中的表达量显著高于宣汉黄牛心脏组织中的表达量（P<0.05），其他基因在藏黄牛和宣汉黄牛心脏组织中的表达则不具有显著性差异（P>0.05）。

图4 藏黄牛和宣汉黄牛miRNA靶基因Pathway 通路分析Fig. 4 Pathway analysis of miRNA target genes in Tibetan cattle and Xuanhan cattle

表5 3个信号通路涉及的靶基因Table 5 Target genes involved in the three signaling pathways富集通路Enrichment pathway靶基因Target gene 胰岛素信号通路Insulin signaling pathwayFASN, PYG, GYS, HK, PHKG, PIK3C, G6PC, PCK, ACACB, BAD, CALM, PIK3R, HRAS, RP-S6e, GSK3B, SOS, EIF4E, FBP, PKA, GRB2, BRAF, RAF1, MAP2K1, MAP2K2, MAPK13, MKNK, ELK1, CRK, JNK, AKT,INSR, RPS6KB, SOCS1, SOCS2, SOCS3, SOCS4, CBL, PRKAR, PTPRF, PTPN1, PRKCI, SORBS1, PPP1C, PDPK1, RAPGEF1, SHC1, IRS2, LIPE, PPP1R3, PHKA-B, SLC2A4, FLOT, APS, RHOQ, EXOC7, TRIP10, SREBP1, PRKAA, PRKAB, PRKAG, FOXO1, PPARGC1A, MTOR, RAPTOR, EIF4EBP1, TSC1, TSC2, RHEB, IKBKB, KRAS, NRAS, ARAF, ACACA, PKLR, GCK, PDE3B, SHIP2, IRS1, IRS3, IRS4, SHC2, SHC3, SHC4, PPP1R3F, PRKCZ, HRAS, GSK3B, CXCR4, PPP3C, RASA1, MAPK1_3, RAC1, PAK1, PAK2, RHOA, ROCK1, GNAI, MET, EPHA1, EPHA2, EPHA4, EPHA5, EPHA6, EPHA7, EPHA8, EPHB1, EPHB2, EPHB3, EPHB4, EPHB6, EFNA, EFNB, FYN, ITGB1, PTK2, PAK3, PAK4, PAK6, PAK7, LIMK1, LIMK2, CFL, PPP3R, SEMA4, SEMA7, L1CAM, PLXNC, ABL1, NRP1, ROBO1, ROBO2, DCC, PLXNA, PLXNB mTOR信号通路mTOR signaling pathwayPIK3C, PTEN, PIK3R, PRKCA, RP-S6e, TNF, EIF4B, EIF4E, BRAF, MAPK1_3, RPS6KA, AKT, RPS6KB, VEGFA, IGF1, PDPK1, PRKAA, MTOR, RAPTOR, EIF4EBP1, TSC1, TSC2, RHEB, IKBKB, STK11, MLST8, RICTOR, HIF1A, ULK1_2_3, DDIT4, STRADA, CAB39, IRS1, AKT1S1, RRAGA_B, RRAGC_D, PRKCB, PRKCG HIF-1信号通路HIF-1 signaling pathwayGAPDH, PDHA, PDHB, HK, PIK3C, PFKFB3, PLCG1, ENO, BCL2, NFKB1, PIK3R, PRKCA, RP-S6e, TNFRSF3, EIF4E, RBX1, CUL2, VHL, SERPINE1, EGF, EGFR, MAP2K1, MAPK1_3, MKNK, AKT, EP300, CAMK2, INSR, IFNG, RPS6KB, STAT3, RELA, IL6R, ERBB2, IGF1R, FLT1, TEK, IFNGR1, IFNGR2, IL6, EPO, VEGFA, IGF1, ANGPT1, ANGPT2, ANGPT4, PLCG2, TFRC, CDKN1B, CDKN1A, MTOR, EIF4EBP1, SLC2A1, NOX, HIF1A, EGLN, TLR4, PDK1, NOS2, NOS3, TF, EDN1, TIMP1, PRKCB, PRKCG

不同字母表示具有显著性差异(P<0.05) Different letters indicate significant difference (P<0.05)图5 随机挑选的8个基因在藏黄牛和宣汉黄牛心脏中的表达水平（A：测序结果；B：验证结果）Fig. 5 Expression levels of 8 randomly selected genes in Tibetan cattle and Xuanhan cattle hearts (A: sequencing results; B: verification results)

文章来源：《心脏杂志》网址: http://www.xzzzzzs.cn/qikandaodu/2021/0415/776.html