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Cx43敲除小鼠胚胎心脏流出道内第二生心区和心(4)
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摘要：图 2｜胚龄10 d的Cx43-/-小鼠横切面免疫组织化学染色形态Figure 2 ｜Cross-sectional immunohistochemical staining of Cx43-/-mouse embryo at embryonic day 10图注：图A为Cx43免疫组织
图 2｜胚龄10 d的Cx43-/-小鼠横切面免疫组织化学染色形态Figure 2 ｜Cross-sectional immunohistochemical staining of Cx43-/-mouse embryo at embryonic day 10图注：图A为Cx43免疫组织化学染色；B-D为Isl1；E，F分别示α-SMA及MHC的免疫组织化学染色。Cx43-/-胚胎小鼠未见Cx43表达(A)；Isl1阳性细胞在前肠腹侧内胚层的正中部以及相邻间充质分布(B，C箭头)，但在鳃弓核心间充质的表达少于Cx43+/+小鼠胚胎(D)；流出道远端表达较强的α-SMA(E箭头)和较弱的MHC(F箭头)；A，B，D-F：×200，标尺=200 μm；C：×400，标尺=100 μm；fg：前肠；cm：核心间充质；oft：流出道
图 4｜胚龄11 d的Cx43-/-小鼠横切面免疫组织化学染色形态Figure 4 ｜Cross-sectional immunohistochemical staining of Cx43-/-mouse embryo at embryonic day 11图注：A为Isl1免疫组织化学染色；B，C分别示α-SMA及MHC的免疫组织化学染色。Cx43-/-小鼠胚胎前肠腹侧第二生心区未能形成典型的锥形结构(A星号)，心包腔背侧壁(A箭头)可见isl1阳性细胞；Isl1阳性流出道远端可见α-SMA(B箭头)，MHC阳性表达(C箭头)；A-C：×200，标尺=200 μm；fg：前肠；oft：流出道
胚龄11 d，Ap2α阳性神经嵴细胞继续沿弓动脉壁向流出道的心内膜垫迁移,弓动脉壁周围可见Cx43与Ap2α双阳性细胞，见图8D。Cx43-/-小鼠胚胎神经管两侧Ap2α阳性的间充质细胞迁移至弓动脉壁周围，呈散在分布。在动脉囊背侧、腹侧以及与之相连的流出道心内膜垫远端仅可观察到少量Ap2α阳性细胞，见图8E。至胚龄11.5 d，大量Ap2α阳性分布于弓动脉周围、前肠腹侧Isl1阳性的锥形结构的两侧，见图5B，8F。此期动脉囊成为流出道的非心肌部，该部分并无心内膜垫，因此弓动脉壁周围的Ap2α不再向此处迁移，见图8F。流出道心内膜垫内间充质细胞数量达高峰，这些细胞不表达Ap2α，而是α-SMA强阳性，见图5D，8F。
2.4 Cx43基因敲除小鼠第二生心区和心脏神经嵴细胞数量减少 对胚龄10-13 d的Cx43-/-小鼠和Cx43+/+小鼠胚胎心脏动脉端的第二生心区和神经嵴细胞进行计数，对计数结果进行统计学分析，显示胚龄10，11，13 d的Cx43基因敲除小鼠进入胚胎心脏Isl1标记的第二生心区前体细胞数量少于野生型小鼠(P＜ 0.01)。胚龄10，11 d的Cx43基因敲除小鼠Ap2α标记的迁移的心脏神经嵴细胞数量少于野生型小鼠(P＜ 0.01)，见图9。
图 5｜胚龄11.5 d的Cx43+/+小鼠横切面免疫组织化学染色形态Figure 5 ｜Cross-sectional immunohistochemistry staining of Cx43+/+mouse embryo at embryonic day 11.5图注：A，B为Isl1免疫组织化学染色，B为A的放大图；C，D分别示MHC及α-SMA的免疫组织化学染色。Cx43+/+小鼠胚胎前肠腹侧Isl1阳性的锥形结构体积增大(A，B星号)，锥形结构的尖端Isl1阳性细胞向流出道非心肌部延伸(B箭头)，该部位MHC染色阴性(C箭头)，α-SMA阳性(D细箭头)；流出道心内膜垫也可见α-SMA强阳性表达(D粗箭头)； A，C，D：×100：标尺=500 μm； B：×200，标尺=200 μm；fg：前肠；oft：流出道
图 6｜胚龄13 d的Cx43+/+小鼠三维重建以及横切面免疫组织化学染色形态Figure 6 ｜Three-dimensional reconstruction and cross-sectional immunohistochemistry staining of Cx43+/+mouse embryo at embryonic day 13图注：A，B示三维重建；C-F，I：示α-SMA，F为E的放大图；G示Isl1，H示MHC的免疫组织化学染色；Cx43-/-小鼠胚胎升主动脉和肺动脉干走形、位置解剖学关系异常(A-F)，升主动脉在其直角转折处与肺动脉干直接相通(B箭头)；升主动脉与肺动脉干管壁的α-SMA阳性区域(F)以及Isl1阳性细胞数量均少于野生型小鼠，且气管腹侧间充质观察不到Isl1的表达(G)，但在肺动脉圆锥及主动脉前庭可见Isl1阳性细胞分布(G箭头)与野生型小鼠无显著区别，该部位同时表达MHC(H箭头)；相比野生型小鼠，右心室小梁密集，心室腔减小(I)；C，D，E，I：×100，标尺=500 μm；F，G，H：×200，标尺=200 μm；oft：流出道；rv：右心室；Iv：左心室；tr：气管；ao：升主动脉；pt：肺动脉干
图注：图A，D，E，F为α-SMA免疫组织化学染色形态，G为Isl1的免疫组织化学染色；F为E的放大图；B，C示三维重建心脏图。Cx43+/+小鼠胚胎心脏各部正在分隔(A)，升主动脉和肺动脉干形成正常的解剖位置关系(B-F)；两动脉壁α-SMA表达阳性(F)且均分布有大量Isl1阳性细胞，与气管腹侧Isl1阳性细胞带相延续(G)，瓣膜以下的心室流出道壁也可见Isl1阳性细胞分布(G箭头)；A，D，E：×100，标尺=500 μm；F，G：×200，标尺=200 μm；oft：流出道；rv：右心室；Iv：左心室；tr：气管；ao：升主动脉；pt：肺动脉干
图 8｜胚龄10-11.5 d的Cx43+/+小鼠和Cx43-/-小鼠横切面免疫组织化学和免疫荧光双染色形态Figure 8 ｜Cross-sectional immunohistochemistry and immunofluorescence staining of Cx43+/+and Cx43-/-mouse embryos at embryonic days 10-11.5图注：图D为Ap2α和Cx43荧光双染，其他均为Ap2α免疫组织化学染色。A，D，F分别为胚龄10，11，11.5 d的Cx43+/+小鼠；B为A的放大图；C，E分别示胚龄10，11 d的Cx43-/-小鼠。CX43+/+小鼠在胚龄10 d Ap2α阳性神经嵴细胞呈鞘状包裹弓动脉壁(A粗箭头)，且在动脉囊腹侧与背侧壁均可见其表达(B箭头)；胚龄11 d，弓动脉壁可见Cx43与Ap2α双阳性细胞(D粗箭头)且弓动脉壁Ap2α阳性神经嵴细胞向流出道的心内膜垫迁移(D细箭头)；胚龄11.5 d 弓动脉壁周围的Ap2α不再向流出道的非心肌部迁移(F细箭头)，且流出道心内膜垫内间充质细胞不表达Ap2α(F粗箭头)；Cx43-/-胚胎小鼠Ap2α阳性细胞分布模式未发生改变，但动脉囊腹侧与背侧壁以及流出道远端心胶质内Ap2α阳性细胞明显少于Cx43+/+小鼠(C，E)；A，C-F：×200，标尺=200 μm；B：×400，标尺=100 μm；fg：前肠；oft：流出道；aa弓动脉；as：动脉囊
文章来源：《心脏杂志》 网址: http://www.xzzzzzs.cn/qikandaodu/2021/0128/328.html