脐带间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病患者3(2)

1.4.2 人脐带间充质干细胞的分离培养及鉴定 河北医科大学第一医院为河北省干细胞应用工程技术研究中心(河北省干细胞中心)共建单位，研究所需人脐带间充质干细胞均由河北省干细胞应用工程技术研究中心免费提供。人脐带间充质干细胞取自健康足月胎儿的脐带，产妇体健，无梅毒、HIV、HBV 等传染病史，并自愿与河北省干细胞中心签署人脐带间充质干细胞供者知情同意书。采用组织块贴壁及传代扩增法对脐带华通氏胶中的人脐带间充质干细胞进行分离培养，利用流式细胞术对分离获得的人脐带间充质干细胞进行表面标记物的鉴定(CD34-PE、、HLA-DR、、CD90-FITC、CD73-D73-APC)，锥虫蓝染色计算干细胞存活率，细胞悬液浓度为5.0×109L-1。

人脐带间充质干细胞的培养及鉴定细胞来源： 脐带华通氏胶来源间充质干细胞由河北省干细胞应用工程技术研究中心提供培养基介绍： 间充质干细胞无血清基础培养基(北京京蒙高科干细胞技术有限公司)添加材料： 间充质干细胞无血清营养添加物(北京京蒙高科干细胞技术有限公司)培养时间： 原代培养7-9 d 获得原代细胞，期间每两三天进行一次半量换液，根据原代细胞集落数和密度，确定向第1 代细胞传代的比例传代情况： 当第1 代细胞融合度达80%-90%时，进行1 ∶3 传代培养，每3 d 传代1 次细胞鉴定： 形态学鉴定(纤维样、漩涡状贴壁生长)，表面标记分子鉴定(CD44、CD90、CD73、CD105 表达阳性率＞95%，CD34、CD45、HLA-DR 阳性表达率＜5%)伦理学批准： 该项目获得河北医科大学第一医院伦理委员会批准通过，河北省干细胞应用工程技术研究中心负责与产妇签署《脐带间充质干细胞采集及冻存知情同意书》其他内容： 采用GMP grade 细胞冻存液冻存第2 代细胞

1.4.3 临床评估

(1)术前评估：通过超声心动图评估心脏功能相关指标并采集相关数据，静脉采血收集患者生化指标，心电图检查采集相关波形，并对患者心功能采用NYHA 分级标准进行分级，记录患者性别、收缩压、舒张压、心率、年龄相关数据。

(2)常规治疗过程及干细胞输注过程：所有受试者经皮冠脉介入治疗及溶栓治疗过程中密切监测患者血压及心律变化。治疗完毕后72 h 内经外周静脉行干细胞输注治疗，观察有无过敏反应、血压升高等不良反应。

(3)术后随访：术后受试者均行心电监护72 h，(36±3)个月后对患者进行随访，随访时行超声心动图检查并采集左室射血分数、左室短轴缩短率、左室收缩末期内径及左室舒张末期内径、左房前后径、主动脉内径、左室壁舒张末期厚度、主肺动脉内径、右房横径、右室横径等数据进行心脏功能相关指标评估和心功能分级评估，分级标准采用NYHA 分级。静脉采血检测血尿素、尿酸、肌酐、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶及血脂相关指标。心电图采集患者Ⅱ、Ⅲ、aVF、V3、V4、V5 导联ST 段距离基线水平。

1.5 主要观察指标 超声心动图相关指标。

1.6 统计学分析 采用SPSS 23.0 统计软件对数据进行分析处理，计量资料采用±s表示，符合正态分布的数据间进行t检验，不符合正态分布资料采用非参数检验方法，P＜ 0.05为差异有显著性意义。由于样本量较小，计数资料采用χ2检验。作图软件为SPSS 23.0 及GraphPad Prism 8.0。

2 结果 Results

2.1 人脐带间充质干细胞的分离培养与鉴定结果 荧光显微镜观察人脐带间充质干细胞呈漩涡状贴壁生长状态，生长良好，见图1。流式细胞仪检测分离获得的人脐带间充质干细胞高表达间充质干细胞标记物CD90、CD73、CD44，阳性表达率均大于95%，不表达造血干细胞标志物CD45 和CD34(阳性表达率≤5%)及主要组织相容性复合体标记物HLA-DR(阳性表达率≤5%)，见图2，说明研究所用的人脐带间充质干细胞符合间充质干细胞的基本特征，且具备低免疫原性。

2.2 参与者数量分析 8 例患者均进入结果分析，无脱落。

2.3 两组患者一般资料比较 治疗前记录两组患者性别、年龄、心率、收缩压及舒张压、吸烟史、糖尿病、高脂血症及用药情况，并进行统计学分析，结果均显示差异无显著性意义，见表1，具有可比性。

2.4 试验流程图 见图3。

2.5 心脏功能相应指标比较 两组患者治疗前心功能各项指标对比差异无显著性意义，因此对两组患者治疗后心功能及治疗前后心功能指标差值进行比较，治疗前两组间数据经t检验及秩和检验提示各指标之间差异无显著性意义(P＞0.05)，遂可直接比较治疗后相应指标及差值以进行说明。干细胞移植组经人脐带间充质干细胞移植治疗后左室射血分数(55.)%较治疗前(49.)%呈现升高趋势；左室短轴缩短率治疗后(30.)%较治疗前(25.)%呈升高趋势；而左房内径、左室收缩末期前后径和舒张末期前后径、主动脉内径、左室舒张末厚度、主肺动脉内径、右房横径、右室横径改善趋势不明显，即差异无显著性意义(P＞ 0.05)，见图4 和表2。两组患者治疗前后心功能指标变化值比较：干细胞移植组患者治疗前后射血分数变化值(6.)%与对照组射血分数变化值(-2.)%以及干细胞移植组患者治疗前后左室短轴缩短率变化值(4.)%与对照组左室短轴缩短率变化值(-1.)%相比差异有显著性意义(P＜ 0.05)，见图5 和表3。

文章来源：《心脏杂志》 网址: http://www.xzzzzzs.cn/qikandaodu/2021/0205/331.html